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色谱双峰指的是明明是同种物质，但在色谱图中却呈现双峰，让实验人员误认为含有两种物质。那么，出现双峰的原因主要有哪些呢？今天小析姐和大聊聊，液相色谱出现“双峰”的原因。
在HPLC分析中，在色谱柱正常，样品浓度适，分析方合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下，峰型应对称而尖锐。但在实际操作中，如果对样品不了解，前处不恰当或者分析方不合等，会出现峰形不正常的情况，其中双峰现象是液相色谱中常见的问题之。
出现色谱双峰的原因般有以下几种：
色谱柱

如果在样品分析时发现每个色谱峰都有双峰出现，尤其在采用物质时，则可以确定是色谱柱出现问题了，般是柱头受或者柱头固定相污染引起的。
如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为大峰带小峰，不定拖尾，这般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，般情况下行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能大，这时可以将进样头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这个对技术要求较高且不能经常做，否则用不了几次，色谱柱会应柱低而报废。如果上述不能解决问题，可能是柱塌陷造成的，此时需要换色谱柱。

溶问题
目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲-、乙腈、水，加各种添加以分离能。样品般用与流动相相溶的溶溶解，溶解方是用流动相溶解。在实际分析中，有时候为了样品的溶解或稳定加入了点的缓冲液，缓冲液的酸-可能会导致样品转化，从而产生双峰现象。此时需要换缓冲液，调整溶pH值，或者用流动相配置样品。
此外，样品要现配现用，避样品溶解液的有机相比例、pH值发生变化而导致的溶应。

进样量
当用溶强度大的试，如甲-、乙腈，乙-，而分析系中以水为主时，如果样品进样量大，如定量管为20ul，此时的物质会出现双峰，第二峰比di峰小(每次都不太样)，且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量少半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶与流动相相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的，此情况下需要少进样量。
另个原因是，进样量不定大，但量很大，色谱图上的双峰紧靠在起，基本上齐高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色谱柱问题)。将样品稀释再进样可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。


样品特

有些样品由于其结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构无分开，而是以个动态平衡存在。在色谱分析时，在个特定的条件下(如pH值、流动相、温度等)，种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红mei素等。

有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱测器，其质谱的总离子流图上较明显，如农啶虫眯(吡虫清)。

pH值
系pH值对色谱双峰的影响出现在各个环节上(前面已经提到)，尤其在缓冲液流动相平衡过程中其影响为明显。当连续进样时，受pH的连续变化影响会经常遇到这种双峰的情况。另外，在样品分析时，流动相的pH尽量远离被分析物的等电点，否则也容易引起双峰的产生。在用离子对试分析时，选择不好条件也会容易引起双峰的产生。
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